تم تقليل تلوث ثقافة الخلية بشكل فعال

يمكن أن يصبح تلوث مزارع الخلايا بسهولة المشكلة الأكثر شيوعًا في مختبرات زراعة الخلايا ، مما يتسبب في بعض الأحيان في عواقب وخيمة للغاية.يمكن تقسيم ملوثات زراعة الخلايا إلى فئتين ، الملوثات الكيميائية مثل الشوائب المتوسطة ، وشوائب المصل والماء ، والسموم الداخلية ، والملدنات والمنظفات ، والملوثات البيولوجية مثل البكتيريا ، والعفن ، والخمائر ، والفيروسات ، والعدوى العابرة للميكوبلازما.ملوثة بخطوط الخلايا الأخرى.على الرغم من أنه من المستحيل القضاء على التلوث تمامًا ، إلا أنه يمكن تقليل تواتره وشدته من خلال الفهم الدقيق لمصدره واتباع تقنيات التعقيم الجيدة

1- يلخص هذا القسم الأنواع الرئيسية للتلوث البيولوجي:
التلوث الجرثومي
التلوث بالفيروسات والعفن
تلوث الميكوبلازما
تلوث الخميرة

1.1 التلوث الجرثومي
البكتيريا هي مجموعة كبيرة من الكائنات الحية الدقيقة وحيدة الخلية في كل مكان.عادة ما يكون قطرها بضعة ميكرونات ويمكن أن تأتي في مجموعة متنوعة من الأشكال ، من الكرات إلى القضبان واللوالب.نظرًا لوجودها في كل مكان وحجمها ومعدل نموها السريع ، تعد البكتيريا ، جنبًا إلى جنب مع الخمائر والعفن ، أكثر الملوثات البيولوجية شيوعًا في زراعة الخلايا.

1.1.1 الكشف عن التلوث الجرثومي
يمكن الكشف عن التلوث الجرثومي بسهولة عن طريق الفحص البصري للثقافة في غضون أيام قليلة من إصابتها ؛
عادة ما تظهر الثقافات المصابة غائمة (أي عكر) ، وأحيانًا مع وجود غشاء رقيق على السطح.
بشكل متكرر يتم أيضًا مواجهة انخفاض مفاجئ في درجة الحموضة في وسط المزرعة.
تحت مجهر منخفض الطاقة ، تظهر البكتيريا كحبيبات صغيرة متحركة بين الخلايا ، ويمكن للمراقبة تحت مجهر عالي الطاقة أن تحل أشكال البكتيريا الفردية.

1.2 التلوث بالفيروسات والفيروسات
1.2.1 تلوث العفن
القوالب هي كائنات دقيقة حقيقية النواة في المملكة الفطرية تنمو في شكل خيوط متعددة الخلايا تسمى خيوط.تحتوي الشبكات الضامة لهذه الخيوط متعددة الخلايا على نوى متطابقة وراثيا تسمى المستعمرات أو الفطريات.

على غرار تلوث الخميرة ، يظل الرقم الهيدروجيني للثقافة مستقرًا خلال المرحلة الأولية من التلوث ثم يزداد بسرعة حيث تصبح المزرعة أكثر عدوى وتصبح غائمة.تحت المجهر ، عادة ما تكون الفطريات خيطية ، وأحيانًا على شكل مجموعات كثيفة من الأبواغ.يمكن أن تعيش جراثيم العديد من العفن في بيئات قاسية للغاية وغير مضيافة خلال مرحلة الخمول ولا يتم تنشيطها إلا عند مواجهة ظروف النمو الصحيحة.

1.2.2 التلوث بالفيروسات
الفيروسات عوامل معدية مجهرية تستحوذ على آلية الخلية المضيفة للتكاثر.حجمها الصغير للغاية يجعل من الصعب اكتشافها في المزرعة وإزالتها من الكواشف المستخدمة في مختبرات زراعة الخلايا.نظرًا لأن معظم الفيروسات لها متطلبات صارمة للغاية بالنسبة لمضيفيها ، فإنها عادة لا تؤثر سلبًا على الثقافات الخلوية للأنواع الأخرى غير المضيف.
ومع ذلك ، فإن استخدام مزارع الخلايا المصابة بالفيروس يمكن أن يشكل خطرًا خطيرًا على صحة العاملين في المختبر ، خاصةً إذا تمت زراعة الخلايا البشرية أو الرئيسيات في المختبر.

يمكن الكشف عن العدوى الفيروسية في مزارع الخلايا عن طريق الفحص المجهري الإلكتروني ، والتلوين المناعي بمجموعة من الأجسام المضادة ، أو ELISA ، أو PCR باستخدام بادئات فيروسية مناسبة.

1.3 تلوث الميكوبلازما
الميكوبلازما هي بكتيريا بسيطة بدون جدران خلوية ، ويُعتقد أنها أصغر الكائنات ذاتية التكاثر.نظرًا لصغر حجمها (عادة أقل من 1 ميكرون) ، يصعب اكتشاف الميكوبلازما حتى تصل إلى كثافات عالية للغاية وتتسبب في تدهور مزارع الخلايا ؛حتى ذلك الحين ، لا توجد عادة علامة واضحة للعدوى.

1.3.1 الكشف عن تلوث الميكوبلازما
قد تستمر بعض الميكوبلازما بطيئة النمو في الثقافات دون التسبب في موت الخلايا ، ولكنها تغير سلوك واستقلاب الخلايا المضيفة في الثقافات.

يمكن أن تتميز عدوى الميكوبلازما المزمنة بانخفاض معدل تكاثر الخلايا ، وانخفاض كثافة التشبع والتراص في مزرعة المعلق.
ومع ذلك ، فإن الطريقة الوحيدة الموثوقة للكشف عن تلوث الميكوبلازما هي اختبار الثقافة بانتظام باستخدام تلطيخ الفلورسنت (على سبيل المثال ، Hoechst 33258) ، أو ELISA ، أو PCR ، أو المناعة ، أو التصوير الشعاعي الذاتي ، أو الاختبار الميكروبي.

1.4 تلوث الخميرة
الخمائر هي حقيقيات النوى وحيدة الخلية في المملكة الفطرية ، ويتراوح حجمها من بضعة ميكرونات (عادة) إلى 40 ميكرون (نادرًا).

1.4.1 الكشف عن تلوث الخميرة
كما هو الحال مع التلوث الجرثومي ، يمكن أن تصبح المزارع الملوثة بالخميرة غائمة ، خاصة إذا كان التلوث في مرحلة متقدمة.يتغير الأس الهيدروجيني في الثقافات الملوثة بالخميرة قليلاً جدًا حتى يصبح التلوث أكثر حدة ، وفي هذه المرحلة يزداد الرقم الهيدروجيني عادةً.تحت المجهر ، تظهر الخميرة كجزيئات فردية بيضاوية أو كروية وقد تنتج جزيئات أصغر.

2. عبر العدوى
على الرغم من أنه ليس شائعًا مثل التلوث الجرثومي ، إلا أن التلوث المتقاطع الواسع للعديد من خطوط الخلايا مع هيلا وغيرها من خطوط الخلايا سريعة النمو هي مشكلة محددة بوضوح لها عواقب وخيمة.احصل على خطوط الخلايا من بنوك الخلايا ذات السمعة الطيبة ، وتحقق بانتظام من خصائص خطوط الخلايا ، واستخدم تقنيات التعقيم الجيدة.ستساعدك هذه الممارسات على تجنب انتقال التلوث.يمكن أن تؤكد بصمات الحمض النووي والتنميط النووي والنمط المتماثل ما إذا كان هناك تلوث متبادل في ثقافة الخلية.

على الرغم من أنه ليس شائعًا مثل التلوث الجرثومي ، إلا أن التلوث المتقاطع الواسع للعديد من خطوط الخلايا مع هيلا وغيرها من خطوط الخلايا سريعة النمو هي مشكلة محددة بوضوح لها عواقب وخيمة.احصل على خطوط الخلايا من بنوك الخلايا ذات السمعة الطيبة ، وتحقق بانتظام من خصائص خطوط الخلايا ، واستخدم تقنيات التعقيم الجيدة.ستساعدك هذه الممارسات على تجنب انتقال التلوث.يمكن أن تؤكد بصمات الحمض النووي والتنميط النووي والنمط المتماثل ما إذا كان هناك تلوث متبادل في ثقافة الخلية.